简今�/strong>

手性分子是一种有机化合物，它具有一种独特的性质，即互为不可重叠的镜像。这意味着它们以两种形式存在，称为对映体，除了原子的三维排列外，它们在各方面都是相同的。虽然这些对映体具有相同的化学性质，但它们可能具有不同的生物活性和药理作用[1,2]、�span style="color: rgb(86, 172, 221); box-sizing: border-box;">因此，手性分子在制药工业中变得越来越重要，它们被用于开发药物和其他治疗方法，因此分离对映体十分重要、�/strong>

超临界流体色谱法(SFC)在手性分子的分离纯化中，具有其他分离技术无法比拟的优点、�span style="color: rgb(86, 172, 221); box-sizing: border-box;">SFC 使用超临界二氧化碳作为流动相，这是一种清洁和绿色的溶剂，很容易从最终产品中去除。此外，SFC 提供了高分辨率和快速的分离、�/strong>

预测哪种固定相能够有效分� SFC 中特定的一组对映异构体，即使在现在看来也是十分困难，这使得我们需要选择合适的手性固定相来不断试错[2]、�/p>

手� SFC 多采用与手性高效液相色�?HPLC)相同的色谱柱，其中最常用的是多糖手性固定相(CSPs)，由于可以选择不同改性的多糖，因此具有很强的通用性[3]。多� CSPs 具有高负载能力，这使得它们在制备规模应用中非常有用。许多商业多糖手性固定相是可用的，主要是基于直链淀粉或纤维素和改性的卤化或非卤化芳香基团。改性后的多糖可以包被或固定在二氧化硅载体上，以增强其对强溶剂的抵抗力[3]。还有其� CSPs 通常用于手� SFC 应用，例如，Pirkle 型手性固定相[3]、�/p>

本文介绍了使� Sepmatix 8x SFC 对反式二苯乙烯氧化物(TSO)进行平行柱筛选，随后通过方法优化转移到制备的 Sepiatec SFC-50、�/strong>

设备

• Sepiatec SFC-50

• Sepmatix 8x SFC

• PrepPure cCDMPC, 5um, 250 x 4.6mm

• PrepPure cADMPC, 5um, 250 x 4.6mm

• PrepPure iADMPC, 5um, 250 x 4.6mm

• PrepPure iCDMPC, 5um, 250 x 4.6mm

• PrepPure iCDCPC, 5um, 250 x 4.6mm

• PrepPure iBT, 8um, 250 x 4.6mm

• PrepPure iBT, 8um, 250 x 10mm

试剂和耗材

• 二氧化碳(99.9%)

• 甲醇(�?9%)

• 乙醇(99%)

• 异丙�?99%)

• 乙腈(99%)

• 反式二苯乙烯氧化�?99%)

（为了安全操作，请注意所有相应的MSDS（�/span>

实验过程

样品制备９�/span>

在筛选和方法优化时，� 0.075g 反式二苯乙烯氧化物溶解在 5.0mL 甲醇中；在堆叠注射时，将 0.1909g 反式二苯乙烯氧化物溶解于 6.0mL 甲醇中、�/p>

使用 Sepmatix 8x SFC 进行筛选：

筛选完全是全自动运行，采用流量控制单元，将每通道内的流量设置� 3mL/min，并将流量平衡。样品自动进样（每根色谱� 5μL），启动平行筛选（运行时长=10分钟）。背压调节器设置� 150bar，柱温箱设置�?2℃、�br style="box-sizing: border-box;"/>

使用 Sepiatec SFC-50 进行制备９�/strong>

PrepPure iBT 色谱柱在设定的流速下预热 4 分钟，样品通过定量环自动进样并运行。背压调节器设置� 150bar，柱温箱设置� 40℃、�/p>

实验结果

色谱柱筛选：

为了确定手性化合物 TSO 的最佳分离条件，进行了不同手性色谱柱的筛选，使用 Sepmatix 8x SFC 允许同时进行 8 根不同色谱柱的平行筛选。本实验一共使用了 6 根不同色谱柱：Chiral iADMPC, Chiral iCDMPC, Chiral iCDCPC, Chiral iBT, Chiral cADMPC � Chiral cCDMPC、�span style="color: rgb(165, 210, 0); text-decoration-line: underline; box-sizing: border-box;">�?为色谱柱筛选结果，其中 Chiral iADMPC 色谱柱不能很好地分离对应异构� TSO（可见表1），� Chiral iCDMPC，Chiral iCDCPC，Chiral iBT，Chiral cADMPC � Chiral cCDMPC 色谱柱可以分� TSO、�/p>

在处理复杂的混合物时，分辨率 R 是一个特别重要的参数，因为它衡量了每一次分离的程度，并且可以被准确识别和量化。例如分辨率 R=1 表明了不理想的分离效果，两个峰本质上并没有分离，更高的分辨率数值代表了更好的分离效果。在实际运行过程中，分辨� R 至少达到 1.5 才会被认为是分离的、�span style="text-decoration-line: underline; color: rgb(165, 210, 0); box-sizing: border-box;">�?显示了不同色谱柱分离 TSO 时的分辨� R。在转移� SFC-50 制备时，选择 iBT 色谱柱，因为它有最佳的分离效果，最容易实现转移，进样量可大大提高、�/p>

�?. 使用 Sepmatix 8x SFC 筛选时不同色谱柱的分辨玆�/strong>

使用 SFC-50 进行结果优化

为了确定改性剂� TSO 的影响，下列每一种改性剂都在等度条件下使用：PrepPure iBT, 8um, 250 x 10mm 色谱柱；甲醇，乙醇，异丙醇，乙腈 (�?span style="text-decoration-line: underline; color: rgb(165, 210, 0); box-sizing: border-box;">�?)、�/p>

甲醇(偶极矩参�? 5[4])在对映体有足够的峰距的情况下，仅� 3 分钟内分� TSO。乙�?偶极矩参�? 4[4])作为极性稍小的改性剂，分离所需时间略大� 3 min。异丙醇(偶极矩参�? 2.5[4])在不� 3.5 分钟的时间内分离 TSO，这是由于异丙醇的极性较小。乙�?偶极矩参�? 8[4])� 2.25 分钟内最有效地分� TSO、�span style="color: rgb(86, 172, 221); box-sizing: border-box;">然而，甲醇被用作进一步实验的改性剂，因为它的窄峰宽和对称峰有望带来高进样量。此外，它比乙腈毒性更小，价格也更便宜、�/strong>

由于流动相中改性剂的含量会因极性变化而对分离产生影响，所以采用了不同的甲醇含�?�?span style="text-decoration-line: underline; color: rgb(165, 210, 0); box-sizing: border-box;">�?)、�/p>

流动相甲醇含量由 20% 连续增加� 35%，运行时间逐渐缩短。当改性剂含量� 35% 时，运行时间可以从大� 3.5 分钟缩短至约 2.5 分钟。不过分辨率有所降低，对映体的峰宽也降低了、�span style="color: rgb(86, 172, 221); box-sizing: border-box;">因此，在进一步的实验中，改性剂的浓度被设定� 35%、�/strong>

每根色谱柱都有可达到最大效率或理论塔板数的固有最佳流速。如果流量减小或增大，则用非最佳分离塔板数进行分离。与液相色谱法相比，SFC 可以使用更高的流速，而分离塔板数不会大幅减少[5]、�span style="color: rgb(86, 172, 221); box-sizing: border-box;">因此＋�/strong>�?显示了流速对分离效率的影响、�/strong>

随着流量的增加，运行时间和峰宽进一步减小。运行时间从大约 2.5 分钟缩短� 2 分钟以内。根据样品的不同，温度和压力对组分的分离和保留的选择性有影响。因此，� 100 bar � 150 bar 以及 40� � 50� 范围内进行了 4 次实验（�?span style="text-decoration-line: underline; color: rgb(165, 210, 0); box-sizing: border-box;">�?）。可以看出，温度和压力的变化对各自的分离没有明显的影响、�span style="color: rgb(86, 172, 221); box-sizing: border-box;">因此，叠层进样时，温度控制在 40℃，背压调节器控制在 150 bar、�/strong>

为了提高分离效率，增� TSO 的浓度和进样�?150μL ~ 250 μL)（见�?左上）。在这些条件下，基线分离仍然是可行的、�span style="text-decoration-line: underline; color: rgb(165, 210, 0); box-sizing: border-box;">�?（右上和下）显示了在与单次进栶�span style="text-decoration-line: underline; color: rgb(165, 210, 0); box-sizing: border-box;">� 6 左上相同的实验条件下，叠层进样时间为 0.97min，即� 0.97 分钟进样一次。在这种情况下，每次额外注入都节省了平衡时间，提高了产能。最终采用基于时间的方法收集馏分。每次进样的紫外信号都表明了该方法具有良好的再现性（�?右上）。垂直线表示收集相应馏分的时间窗口、�/p>

结论

在文中，使用 Sepmatix 8x SFC 仪器进行� TSO 为分析物的手性柱筛选，将最合适的手性色谱柱，转移到 Sepiatec SFC-50 仪器进行制备、�strong style="box-sizing: border-box;">每根手性柱对手性物质的反应都不同，这就是为什么在纯化过程之前必须进行筛选的原因，作为标准物质的 TSO 可以在许多不同的手性柱上分离、�/span>

随后� SFC-50 上放大，并利用制备柱对等度纯化的方法进行优化、�span style="color: rgb(86, 172, 221); box-sizing: border-box;">结果表明，改性剂的选择、改性剂在流动相中的比例和流量对分离效果有较大影响。在这些特定条件下，温度和压力的变化对分离效果的影响不大。在一般情况下，这两个参数也可以改变以优化分离条件、�/strong>

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