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Biochrom30+氨基酸分析仪氧化水解法检测玉米胚芽粕?/p>

Biochrom30+氨基酸分析仪氧化水解法检测玉米胚芽粕?/div>

Biochrom30+氨基酸分析仪氧化水解法检测玉米胚芽粕中氨基酸

6.png

一、样品前处理

1?span new="" times="">所用试剁/p>

必须使用重蒸馏水或与之等质的水(电导率<10μs(/p>

1?双氧?30%

1?甲酸?8-100%

1?苯酚:须重蒸

1?偏重亚硫酸钠

1?氢氧化钠

1?盐酸,ρ=1.18g/ml

1?水解剂:6mol/l 的HCL?L?g苯酚9/p>

?g苯酚?.3)到492mL盐酸(3.7)中,然后用水定容?L

1?20种氨基酸标准?/p>

行号

氨基酷/p>

行号

氨基酷/p>

1

CYS-OX

磺基丙氨酷/p>

2

TAU

牛磺酷/p>

3

MET-SO2

蛋氨酸砜

4

ASP

天冬氨酸

5

THR

苏氨酷/p>

6

SER

丝氨酷/p>

7

GLU

谷氨酷/p>

8

PRO

脯氨酷/p>

9

GLY

甘氨酷/p>

10

ALA

丙氨酷/p>

11

VAL

缬氨酷/p>

12

MET

蛋氨酷/p>

13

ILE

异亮氨酸

14

LEU

亮氨酷/p>

15

NLE

正亮氨酸

16

TYR

酪氨酷/p>

17

PHE

苯丙氨酸

18

HIS

组氨酷/p>

19

LYS

赖氨酷/p>

20

ARG

精氨酷/p>

2?span new="" times="">标样配置

氨基酸混合标准储备液:称取上述各氨基酸标样使用PH2.2的Load Buffer配置?.5umol/L的储备液备用、/p>

取氨基酸混合标准储备液与PH2.2的Load Buffer?:9的比例配置成0.25umol/L的标准液、/p>

3?span new="" times="">前处理设夆/p>

1)天平

2)水解箠/p>

3)量筒

4)无油真空泴/p>

5)干浴水解、浓缩仪

6)移液箠/p>

7)0.45um滤膜

4?span new="" times="">样品制备(参考欧盟饲料指?8/64/EC (/p>

1?span new="" times="">样品的准夆/p>

粉碎样品,通过0.5mm的筛孔。高水分的样品粉碎前必须低于50℃鼓风干燥或者冷冻干燥。高脂肪含量的样品粉碎前必须用轻质石油(3.12)脱脂、/p>

2?span new="" times="">氧化

从准备好的样品中称取?.1~1克样品,准确?.2mg,于100 ml带螺纹盖子的瓶子中,称取的样品应该含有大?0mg氮,水分不能超过100mg。将瓶子放于冰水浴中冷却?℃,?ml氧化试剂(过甲酸苯酚),用带弯头的玻璃刮勺混合。用空气密封膜将瓶子和刮勺一起密封,密封后一起放?℃冰箱的冰水浴中,放?6小时。之后,从冰箱中取出,加0.84克偏重亚硫酸钠(3.4)来分解过量的氧化试剂、/p>

3?span new="" times="">水解

加入25毫升盐酸-苯酚溶液, 然后将反应瓶放在烘箱中,温度控制?10摄氏度,旋松帽子(防止玻璃瓶子破裂),水?小时。然后快速旋紧瓶塞(戴手套和护眼罩)将其继续在烘?10摄氏度下水解23小时、/p>

4?span new="" times="">加入内标并且调节pH值到2.20

当水解反应结束后,将反应瓶从烘箱中取出,并且打开瓶口(戴手套和护目镜)。冷却后用定量加样器准确加入15.00?15毫升)正亮氨酸标准溶液,混合并且转移水解溶液到250毫升的塑料烧杯中。加入大?25毫升柠檬酸缓冲液?9毫升氢氧化钠水溶?将实验烧杯放入到样品容器中用氢氧化钠水溶液将溶液调节到pH为正?.20、/p>

转移一部分溶液(不需要全部)?0毫升有盖子的塑料瓶中。可以马上测定或者放入冰箱等到分析的时候测定、/p>

二、分析方法描述(Biochrom 30+(/p>

氨基酸分析仪分析方法参数9/p>

1)色谱柱:Biochrom Na型阳离子交换树脂柱,4.6´20cm

2)分离程序9/p>

NO.

Time

Temp

Buffer

Pump

Nin

Rec

Commands

1

01:00

53

3

35.0ml/h

ON

OFF

2

00:00

53

3

35.0ml/h

ON

OFF

Reset

3

03:30

53

3

35.0ml/h

ON

OFF

Load

4

15:45

53

1

35.0ml/h

ON

ON

5

12:00

58

2

35.0ml/h

ON

ON

6

02:00

58

4

35.0ml/h

ON

ON

7

26:00

92

4

35.0ml/h

ON

ON

8

04:00

92

6

35.0ml/h

ON

ON

9

04:00

92

3

35.0ml/h

ON

ON

10

14:00

53

3

40.0ml/h

OFF

OFF

11

02:45

53

3

35.0ml/h

ON

OFF

End

3)运行时间:分析时?5min

4)反应单元温度?35°C、/p>

5)检测波长:570nm?40nm同时检测、/p>

三、外标法定量

附、玉米胚芽粕分析图谱

3.png

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