一�?/span>样品前处琅�/span>

1�?/span>所用试剁�/span>

必须使用重蒸馏水或与之等质的水（电导率＜10μs（�/span>

1�?双氧氳�/span>,30%

1�?甲酸＋�/span>98-100%

1�?苯酚：须重蒸

1�?偏重亚硫酸钠

1�?氢氧化钠

1�?盐酸，ρ＝1.18g/ml

1�?水解剂：6mol/l皃�/span>HCL＋�/span>1L�?/span>1g苯酚９�/span>

功�/span>1g苯酚＇�/span>3.3）到492mL盐酸(3.7)中，然后用水定容臲�/span>1L

1�?20种氨基酸标准�?/span>

行号	氨基酷�/span>		行号	氨基酷�/span>
1	CYS-OX	磺基丙氨酷�/span>	2	TAU	牛磺酷�/span>
3	MET-SO2	蛋氨酸砜	4	ASP	天冬氨酸
5	THR	苏氨酷�/span>	6	SER	丝氨酷�/span>
7	GLU	谷氨酷�/span>	8	PRO	脯氨酷�/span>
9	GLY	甘氨酷�/span>	10	ALA	丙氨酷�/span>
11	VAL	缬氨酷�/span>	12	MET	蛋氨酷�/span>
13	ILE	异亮氨酸	14	LEU	亮氨酷�/span>
15	NLE	正亮氨酸	16	TYR	酪氨酷�/span>
17	PHE	苯丙氨酸	18	HIS	组氨酷�/span>
19	LYS	赖氨酷�/span>	20	ARG	精氨酷�/span>

2�?/span>标样配置

氨基酸混合标准储备液：称取上述各氨基酸标样使�?/span>PH2.2皃�/span>Load Buffer配置戏�/span>2.5umol/L的储备液备用、�/span>

取氨基酸混合标准储备液与PH2.2皃�/span>Load Buffer�?/span>1:9的比例配置成0.25umol/L的标准液、�/span>

3�?/span>前处理设夆�/span>

1)天平

2)水解箠�/span>

3)量筒

4)无油真空泴�/span>

5)干浴水解、浓缩仪

6)移液箠�/span>

7)0.45um滤膜

4�?/span>样品制备（参耂�/span>欧盟饲料指令98/64/EC（�/span>

1�?/span>样品的准夆�/span>

粉碎样品，通过0.5mm的筛孔。高水分的样品粉碎前必须低于50ℂ�/span>鼓风干燥或者冷冻干燥。高脂肪含量的样品粉碎前必须用轻质石油（3.12）脱脂、�/span>

2�?/span>氧化

从准备好的样品中称取�?/span>0.1~1兊�/span>样品，准确到0.2mg，于100 ml带螺纹盖子的瓶子中，称取的样品应该含有大�?/span>10mg氮，水分不能超过100mg。将瓶子放于冰水浴中冷却臲�/span>0ℂ�/span>，加5ml氧化试剂（过甲酸苯酚），用带弯头的玻璃刮勺混合。用空气密封膜将瓶子和刮勺一起密封，密封后一起放�?/span>0ℂ�/span>冰箱的冰水浴中，放置16小时。之后，从冰箱中取出，加0.84兊�/span>偏重亚硫酸钠＇�/span>3.4）来分解过量的氧化试剂、�/span>

3�?/span>水解

加入25毫升盐酸-苯酚溶液,然后将反应瓶放在烘箱中，温度控制�?/span>110摄氏度，旋松帽子（防止玻璃瓶子破裂），水觢�/span>1小时。然后快速旋紧瓶塞（戴手套和护眼罩）将其继续在烘箰�/span>110摄氏度下水解23小时、�/span>

4�?/span>加入内标并且调节pH值到2.20

当水解反应结束后，将反应瓶从烘箱中取出，并且打开瓶口（戴手套和护目镜）。冷却后用定量加样器准确加入15.00兊�/span>(15毫升)正亮氨酸标准溶液，混合并且转移水解溶液到250毫升的塑料烧杯中。加入大�?/span>125毫升柠檬酸缓冲液咋�/span>19毫升氢氧化钠水溶涱�/span>,将实验烧杯放入到样品容器中用氢氧化钠水溶液将溶液调节�?/span>pH为正奼�/span>2.20、�/span>

转移一部分溶液（不需要全部）�?/span>50毫升有盖子的塑料瓶中。可以马上测定或者放入冰箱等到分析的时候测定、�/span>

二�?/span>分析方法描述＇�/span>Biochrom 30+（�/span>

氨基酸分析仪分析方法参数９�/span>

1)色谱柱：Biochrom Na型阳离子交换树脂柱，4.6´20cm

2)分离程序９�/span>

NO.	Time	Temp	Buffer	Pump	Nin	Rec	Commands
1	01:00	53	3	35.0ml/h	ON	OFF
2	00:00	53	3	35.0ml/h	ON	OFF	Reset
3	03:30	53	3	35.0ml/h	ON	OFF	Load
4	15:45	53	1	35.0ml/h	ON	ON
5	12:00	58	2	35.0ml/h	ON	ON
6	02:00	58	4	35.0ml/h	ON	ON
7	26:00	92	4	35.0ml/h	ON	ON
8	04:00	92	6	35.0ml/h	ON	ON
9	04:00	92	3	35.0ml/h	ON	ON
10	14:00	53	3	40.0ml/h	OFF	OFF
11	02:45	53	3	35.0ml/h	ON	OFF
End

3)运行时间：分析时闳�/span>65min

4)反应单元温度９�/span>135°C、�/span>

5)检测波长：570nm�?/span>440nm同时检测、�/span>

三�?/span>外标法定野�/span>

附、鱼粈�/span>A分析图谱