一、样品前处理

1、所用试剁�/strong>

1�? 浓盐酸，优级�?br style="box-sizing: border-box;"/>

1�? 6mol/L 盐酸：浓盐酸与水1:1混合

1�? 水：去离子水

1�? 苯酚：须重蒸

1�? 19种氨基酸标准�?/p>

2、标样配�?/strong>

• 氨基酸混合标准储备液：含有天冬氨酸、苏氨酸�?7种常见组成蛋白质的氨基酸、�br style="box-sizing: border-box;"/>

• 牛磺酸标准储备液：用PH2.2的柠檬酸缓冲液配置成2.5umol/L的储备液备用、�/p>

• 正亮氨酸标准储备液：用PH2.2的柠檬酸缓冲液配置成2.5umol/L的储备液备用、�/p>

• 璜基丙氨酸标准储备液：用PH2.2的柠檬酸缓冲液配置成2.5umol/L的储备液备用、�/p>

• 蛋氨酸砜标准储备液：用PH2.2的柠檬酸缓冲液配置成2.5umol/L的储备液备用、�/p>

• 羟脯氨酸标准储备液：用PH2.2的柠檬酸缓冲液配置成2.5umol/L的储备液备用、�/p>

• 鸟氨酸标准储备液：用PH2.2的柠檬酸缓冲液配置成2.5umol/L的储备液备用、�/p>

�?7种氨基酸混合标准储备液、牛磺酸、正亮氨酸、璜基丙氨酸、蛋氨酸砜、羟脯氨酸、鸟氨酸及PH2.2的柠檬酸缓冲液按�?:1:1:1:1:1:1:3配置�?.25umol/L的标准品待用、�/p>

3、前处理设备

1) 天平

2) 水解�

3) 量筒

4) 无油真空�

5) 干浴水解、浓缩仪

6) 移液�

7) 0.45um滤膜

4、样品制备（参考欧盟饲料指�?8/64/EC （�/strong>

1、样品的准备

粉碎样品，通过0.5mm的筛孔。高水分的样品粉碎前必须低于50℃鼓风干燥或者冷冻干燥。高脂肪含量的样品粉碎前必须用轻质石油（3.12）脱脂、�/p>

2、氧匕�/p>

从准备好的样品中称取�?.1~1克样品，准确�?.2mg，于100 ml带螺纹盖子的瓶子中，称取的样品应该含有大�?0mg氮，水分不能超过100mg。将瓶子放于冰水浴中冷却�?℃，�?ml氧化试剂（过甲酸苯酚），用带弯头的玻璃刮勺混合。用空气密封膜将瓶子和刮勺一起密封，密封后一起放�?℃冰箱的冰水浴中，放�?6小时。之后，从冰箱中取出，加0.84克偏重亚硫酸钠（3.4）来分解过量的氧化试剂、�/p>

3、水觢�/p>

加入25毫升盐酸-苯酚溶液, 然后将反应瓶放在烘箱中，温度控制�?10摄氏度，旋松帽子（防止玻璃瓶子破裂），水�?小时。然后快速旋紧瓶塞（戴手套和护眼罩）将其继续在烘�?10摄氏度下水解23小时、�/p>

4、加入内标并且调节pH值到2.20

当水解反应结束后，将反应瓶从烘箱中取出，并且打开瓶口（戴手套和护目镜）。冷却后用定量加样器准确加入15.00�?15毫升)正亮氨酸标准溶液，混合并且转移水解溶液到250毫升的塑料烧杯中。加入大�?25毫升柠檬酸缓冲液�?9毫升氢氧化钠水溶�?将实验烧杯放入到样品容器中用氢氧化钠水溶液将溶液调节到pH为正�?.20。转移一部分溶液（不需要全部）�?0毫升有盖子的塑料瓶中。可以马上测定或者放入冰箱等到分析的时候测定、�/p>

二、分析方法描述（Biochrom 30+（�/span>

氨基酸分析仪分析方法参数９�br style="box-sizing: border-box;"/>

1) 色谱柱：Biochrom Na型阳离子交换树脂柱，4.6X20cm

2) 分离程序９�/p>

3) 运行时间：分析时�?5min

4) 反应单元温度�?35°C、�/p>

5) 检测波长：570nm�?40nm同时检测、�/p>

附、鱼料分析图谱及做样结果