Biochrom30+氨基酸分析仪检测石斑鱼中水解氨基酸

摘要９�/span>

以石斑鱼为原料，使用Biochrom30+全自动氨基酸自动分析仪对其肌肉的氨基酸组成进行分析。结果表明石斑鱼肌肉中氨基酸总量的质量百分比�?7753.114mg/100g，必需氨基�?不含色氨�?占氨基酸总量�?0.63%，鲜味氨基酸占氨基酸总量�?8.52%、�/span>

1. 样品前处琅�/span>

2. 所用试剁�/span>

1. 浓盐酸，浓度�?6%,优级�?/span>

2. 6mol/L盐酸９�/span>�?00mL 盐酸加水稀释至1000mL,混匀、�/span>

3. 水：去离子水

4. 苯酚：须重蒸

5. 17种氨基酸标准�?/span>

行号	氨基酷�/span>		行号	氨基酷�/span>
1	Asp	天冬氨酸	2	Thr	苏氨酷�/span>
3	Ser	丝氨酷�/span>	4	Glu	谷氨酷�/span>
5	Pro	脯氨酷�/span>	6	Gly	甘氨酷�/span>
7	Ala	丙氨酷�/span>	8	Cys	胱氨酷�/span>
9	Val	缬氨酷�/span>	10	Met	蛋氨酷�/span>
11	Ile	异亮氨酸	12	Leu	亮氨酷�/span>
13	Tyr	酪氨酷�/span>	14	Phe	苯丙氨酸
15	His	组氨酷�/span>	16	Lys	赖氨酷�/span>
17	Arg	精氨酷�/span>

1. 前处理设夆�/span>

2. 分析天平:感量分别� 0.0001g�?.00001g、�/span>

3. 水解箠�耐压螺盖玻璃试管,体积�?5mL

4. 匀浆机�

5. 无油真空泴�/span>

6. 干浴水解浓缩�?/span>

7. 移液箠�/span>

8. 0.22um滤膜

9. 样品制备（参考国栆�/span>GB 5009.124-2016（�/span>

   原料鱼手工去除鱼鳞、鱼皮、鱼刺和内脏，采肉后清洗、沥干，在匀浆机中打成肉糜，�?18℃冰箱中冷冻保存，分析时取出解冻后使用、�/span>

10. 试样水解

    称取含蛋發�/span>7.5-25mg的试样，加入水解管中，加�?/span>15mL 6mol/L盐酸＋�/span>继续向水解管内加入苯�?滴~4滴。冷�?min~5min,接到真空泵的抽气管上,抽真�?接近0Pa),然后充入氮气,重复抽真�?充入氮气3次后,在充氮气状态下拧紧螺盖�将水解管放入干浴水解浓缩仪中＋�/span>110°C水解22-24h，冷却、混匀、开管、转移并定容�?0ml容量瓶中，用移液管取适量样液，在干浴水解浓缩仪中50°C吹干，必要时加入少许水，重复吹干1-2次，加入3-5mL PH2.2的稀释上机用柠檬酸钠缓冲涱�/span>溶解,振荡混匀�?吸取溶液通过0.22μm 滤膜�?转移至仪器进样瓶,为样品测定液,供仪器测定用、�/span>

11. 分析方法描述＇�/span>Biochrom 30+（�/span>

    氨基酸分析仪分析方法参数９�/span>

12. 色谱柱：Biochrom Na型阳离子交换树脂柱，4.6´20cm

13. 分离程序９�/span>

NO.	Time	Temp	Buffer	Pump	Nin	Rec	Commands
1	01:00	48	1	35.0ml/h	ON	OFF
2	00:00	48	1	35.0ml/h	ON	OFF	Reset
3	01:00	48	1	35.0ml/h	ON	OFF	Load
4	06:40	48	1	35.0ml/h	ON	ON
5	13:00	52	2	35.0ml/h	ON	ON
6	01:00	52	5	35.0ml/h	ON	ON
7	16:00	95	5	35.0ml/h	ON	ON
8	04:00	95	6	35.0ml/h	ON	ON
9	04:00	95	1	35.0ml/h	ON	ON
10	09:00	48	1	43.0ml/h	OFF	OFF
11	02:00	48	1	35.0ml/h	ON	OFF
End

1. 运行时间：经分析时间+再生时间57min

2. 反应单元温度９�/span>135°C、�/span>

3. 检测波长：570nm�?/span>440nm同时检测、�/span>

4. 样品中氨基酸含量的计箖�/span>

   样品测定液氨基酸的含量按�?2)计算:

   ci = cs/As ×Ai…………………�?2)

   式中:

   ci ——–�/span>样品测定液氨基酸i的含�?单位为纳摩尔每毫�?nmol/mL);

   Ai ——–�/span>试样测定液氨基酸i的峰面积;

   As ——–�/span>氨基酸标准工作液氨基酸s的峰面积;

   cs ——–�/span>氨基酸标准工作液氨基酸s的含�?单位为纳摩尔每毫�?nmol/mL)、�/span>

   试样中各氨基酸的含量按式(3)计算:

   Xi =(ci ×F ×V ×M)/(m ×10⁹)×100 …………………�?3)

   式中:

   Xi ——–�/span>试样中氨基酸i的含�?单位为克每百�?g/100g);

   ci ——–�/span>试样测定液中氨基酸i的含�?单位为纳摩尔每毫�?nmol/mL);

   F ——–�/span>稀释倍数;

   V ——–�/span>试样水解液转移定容的体积,单位为毫�?mL);

   M ——–�/span>氨基酸i的摩尔质�?单位为克每摩�?g/mol);

   m ——–�/span>称样�?单位为克(g);

   10⁹——–�/span>将试样含量由纳克(ng)折算成克(g)的系�?

   100 ——–�/span>换算系数、�/span>

   附、石斑鱼分析图谱及做样结枛�/span>

   

   

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