担心PCR扩增的影响？来看自动化PCR-Free解决方案

常规高通量测序的文库构建，需�?/span>PCR扩增。主要是为了对微野�/span>DNA样本进行扩增，提高库容；另一方面，放大核酸荧光信号，提高测序准确度。然而，PCR扩增同样也有着无法忽视一些问题：

1.扩增过程中产生复制错误，累积下去，产生假阳性；

2.扩增会有一定的偏好性，比如GC含量异常的区域和二级结构等区域，扩增效率低，难以覆盖：�/span>

3.扩增的循环数越多，重复率＇�/span>Duplication）越高，造成测序成本增加、浪费测序数据、�/span>

什么是PCR-Free技�?/span>

常规扩增建库有诸多问题，那么PCR-Free技术也就营运而生、�/span>PCR-Free技术，相较于常规建库，其建库步骤为：基因组片段匕�/span>-末端修复-加接夳�/span>-纯化-文库质控，省去了PCR扩增的步骤、�/span>

1.PCR-Free建库技术：

2.省去扩增步骤，缩短建库时间；

3.避免使用高保真聚合酶，降低建库成本；

4.减少扩增产生的复制错误；

5.避免扩增偏好性；

6.避免扩增产生皃�/span>Duplication，降低测序成本、�/span>

llumina DNA PCR-Free Prep＋�/span>Tagmentation DNA建库即运用了PCR-free的建库方式，并同时采用创新型链接在磁珠上的转座酶＇�/span>BLT），将接头连接和DNA片段化结合到一个简单快速的反应中，实现WGS高度均匀的覆盖、�/span>

针对PCR-Free建库方法，我们推出了基于Biomek i7工作站的Illumina DNA PCR free文库构建自动化方案，该方案可使用低投入量＇�/span>25-99ng）或标准投入量（100-2000ng（�/span>gDNA进行建库，同时进衋�/span>96例样本的建库、�/span>

·减少手动操作时间

·减少系统设置何潜在的移液错误

·标准化工作流程改进实验结枛�/span>

·快速安裄�/span>

Biomek i7工作竘�/span>

国�/span>1. Biomek i7 Hybrid Genomics Workstation工作桌面

·集成亅�/span>96通道移液头与灵活8通道移液头；

·灵活8通道可配置固定针和可替换吸头通道搭配：�/span>

·96通道可选择上一列、一行、多行等不规则形状排列吸头，实现不定样本数液体转移；

·斜侧抓板机械手可360度旋转，轻松实现台面全覆盖；

·多达45个工作板位；

·可实现震荡、加�?/span>/冷却、吸头清洗等功能：�/span>

·开放式工作桌面，可轻松整合外部设备，如（自�?/span>PCR仪）、�/span>

国�/span>2. Illumina PCR free DNA Library Prep自动化工作流

使用Biomek i7工作站进衋�/span> Illumina PCR free文库构建，轻松解放双手，把更多的活交给工作站来进衋�/span>

�?/span>1. Biomek i7 Hybrid Genomics Workstation自动匕�/span>Illumina PCR free流程预估时间（大亍�/span>100ng gDNA投入（�/span>

Method Options Selector (MOS（�/span>

MOS能够选择样本数量、投入量�?/span>Index开始使用位置，以最大限度地提高灵活性、适应性和方法执行的简易性、�/span>

国�/span>3. Illumina PCR-Free建库方法选项选择�?/span>

Guided Labware Setup (GLS)

GLS基于MOS中选择的选项生成的，并提供用户特定的图形设置说明，包括试剂体积计算和准备试剂的分步说明、�/span>

国�/span>4.引导式实验室设置提供配方注释，指示试剂量（上图）＋�/span>

并指导用户正确设置平台（下图（�/span>

DeckOptixFinal Check (DFC)

在开始运行自动化流程之前＋�/span>BML中的DFC功能，会通过实时拍照的方式分析工作桌面耗材摆放，以减少设置错误，例如吸头、深孔板摆放位置错误、�/span>

实验设计

为了证明�?/span>i7双杂交工作站上进衋�/span>96个样品文库制备的能力，我们从人细胞系NA12878 gDNA制备文库。将起始浓度丹�/span>150 ng�?/span>300 ng�?/span>400 ng�?/span>500 ng咋�/span>750 ng皃�/span>48�?/span>gDNA样本以及阴性模板对照（NTC）随机放�?/span>96孔板，如下所示、�/span>