多壁碳纳米管对人胸膜间皮细胞microRNAs表达的影哌/div>
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2017-12-19
编号:YYHY00494
篇名 多壁碳纳米管对人胸膜间皮细胞microRNAs表达的影
作者: 尹先 ;鞠莉 ;武为 ;肖芸 ;应士 ;张敏 ;楼建 ;贾振 ;夏海 ;朱丽 ;张幸
关键词:多壁碳纳米管 胸膜 微rRNA 间皮
机构:浙江省医学科学院职业病防治研究所,杭州310013
摘要 目的探讨多壁碳纳米管(multi—walled carbon nanotubes,MWCNT)对人胸膜间皮细胞MeT-5A的细胞毒性及对细胞microRNAs(miRNAs)表达的影响。方法用乳酸脱氢酶活力检测法(LDH)检测不同浓度MWCNT染毒24h和同一浓度不同染毒时间细胞相对LDH活力改变;从课题组前期microRNA芯片结果中筛选间皮瘤细胞中差异表达miRNAs,并用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT—qPCR)验证有显著改变?个miRNAs的表达改变;MeT-5A细胞?0μg/cm。的MWCNT处理0??4?8?2h后,用RT—qPCR方法检测上?个有明显改变的miRNAs的表达水平;用Targetscan和miRanda两种在线软件对差异表达miRNAs进行靶基因预测,最后用David6?对靶基因进行基因本体论(GO)分析和全基因组及代谢途径数据库(KEGG)通路分析。实验数据录入SPSS17?软件,使用单因素方差分析(one—wayANOVA)和Dunnett—T检验进行统计分析。结果MWCNT染毒MeT-5A24h后,与对照组比较,染毒剂量大于等?0μg/cm。时,细胞存活率降低,差异有统计学意义(P??1);利用高通量方法从肿瘤细胞系中筛选获?个差异表达的miRNAs:hsa—miR-155表达上调,hsa.miR?0d-5p,hsa—miR-34c-5p,hsa-miR-28-5p和hsa—miR-324?p的表达下调;用RT—qPCR方法进一步验证,两者结果一致?0μg/cm。MWCNT染毒不同时间后,5个miRNAs表达改变与芯片结果一致。我们对这些差异表达miRNAs进行靶基因预测和通路分析,发现AKAP13,CCND3,Twist,E—Cadherin等是其潜在的功能靶点,主要参与肿瘤坏死因子p信号通路,肿瘤信号通路,小细胞肺癌等信号通路。结论MWCNT可对MeT-5A造成细胞毒性作用,染毒可引起MeT-5A细胞miRNAs差异表达,差异表达的miRNAs可能参与肿瘤相关的信号通路