编号：YYHY00427
篇名� 以壳聚糖纳米微球为载体的Crisp1-DNA避孕疫苗的制备及体外表达
作者： 罗金 ;杨菁 ;程琰 ;张� ;徐望�
关键词：Crisp-1 避孕 DNA疫苗 壳聚� 纳米微球
机构：武汉大学人民医院生殖医学中�?武汉430060
摘要� 目的构建以壳聚糖纳米微球为载体的Crisp1DNA疫苗,对其物理学、生物学活性进行测�?并评估其在COS-7细胞中的表达情况及细胞毒性。方法采用本实验室前期构建的真核表达质粒pcDNA3.1-Crisp1,以复凝法制备载Crisp1DNA疫苗的壳聚糖纳米粒（CS/DNA NPs�?用透射电镜以及凝胶阻滞分析对其相关物理学、生物学活性进行测�?然后将载Crisp1DNA疫苗的壳聚糖纳米粒转染至COS-7细胞,检测其细胞毒�?并用间接免疫荧光法鉴定其在细胞内的表达情况。结果透射电镜结果显示纳米粒形态较均一,平均粒径�?89.3nm,Zeta电位约为�?.2mV。凝胶阻滞分析显示壳聚糖微粒可将DNA疫苗完全阻滞于加样孔中并保护DNA质粒不降解。MTT试验显示壳聚糖组细胞存活率显著高于脂质体组（P�?.01）。间接免疫荧光实验结果显示CS/DNA NPs能在COS-7细胞中有效表达Crisp 1抗原蛋白。结论由壳聚糖纳米微球介导的Crisp1DNA疫苗,可在真核细胞中有效地表达,且具有较小的细胞毒�?为进一步发展安全有效的DNA避孕疫苗打下了基础�