一�?/span>实验试剂９�/span>

1.CTAB抽提液：

2%＇�/span>w/v（�/span>CTAB

100 mmol/L Tris-HCl(pH8.0)

20 mmol/L EDTA(pH8.0)

1.4 mol/L NaCl

抽提含多酚较多的植物材料时（比如木本植物），上述抽提液中可另加入2%皃�/span>PVP（聚乙烯吡咯烷酮）、�/span>

抽提液于室温保存，可在几年内保持稳定。临用之前向装有上述抽提液的试管中加入约2%-3%＇�/span>v/v）的β-巯基乙醇、�/span>

2、醋酸钠９�/span>

3 mol/L NaAc

用冰乙酸谂�/span>pH值至4.8-5.2、�/span>

3�?/span>TE溶液９�/span>

4、其它：

无水乙醇，异丙醇＋�/span>75％乙醇，酚：氯仿：异戊醇＇�/span>25９�/span>24９�/span>1），氯仿：异戊醇＇�/span>24９�/span>1），β-巯基乙醇，重蒸水、�/span>

二�?/span>实验步骤

1.样品研磨

1)叕�/span>1g的样品放�?/span>2ml ep管中

2)加入1-2粑�/span>5mm研磨珟�/span>

3)加入1ml皃�/span>CTAB抽提涱�/span>

4)将加有样品的ep管放入高通量组织研磨仪的适配器中，盖奼�/span>

5)将研磨转速调�?/span>1800，设定研磨时间为90秒（可根椐样品的研磨的难易程度来调节，此数据是以银杏落叶为样本得出）

6)启动研磨仪对样品进行研磨（根据不同的样品，本身性质不同，需要对研磨频率和研磨时间进行适当的调整）

2. DNA的粗描�/span>

1)将研磨好的样品取出于65ℂ�/span>水浴45min，中途间隔（轻柔）振荡三次混匀

2)冷却后加入等体积氯仿：异戊醇＇�/span>24９�/span>1），轻柔颠倒混匀使乳匕�/span>10min

3) 7000g-8000g离心10min＇�/span>18-20ℂ�/span>（�/span>

4)吸取上清于另一干净的离心管�?/span>

5)（根据需要可用氯仿：异戊醇如上法重复抽提一次，吸取上清（�/span>

6)加入与上清液等体积（且已亍�/span>-20ℂ�/span>预冷的异丙醇，颠倒混匀，约1臲�/span>2分钟后应有白色絮状沉淀出现（若没有，则加入上清涱�/span>1/5臲�/span>1/10体积皃�/span>pH4.8-5.2皃�/span>3M NaAc,混匀，于，�/span>20ℂ�/span>冰箱中沉淀30min（�/span>

7)离心法沉淀DNA

8)�?/span>75%乙醇中漂洖�/span>DNA数分钟以上，�?/span>Tip头吸干乙醆�/span>

9)�?/span>1ml 75%乙醇再漂洗一欠�/span>

10)沉淀于室温或64ℂ�/span>以下的恒温箱中干燥片刻至刚出现半透明，不要过度干�?/span>

11)�?/span>50μlTE溶解沉淀，可�?/span>65ℂ�/span>水浴助溶＋�/span>DNA粗提物可用于粗略PCR等、�/span>

3. DNA的纯匕�/span>

1)吐�/span>TE溶解皃�/span>DNA粗提物中�?/span>4-10μl RNaseA(�?/span>40-100μg)

2)亍�/span>37ℂ�/span>酶解RNA 1hr戕�/span>65ℂ�/span>酶解RNA 30min以上

3)加入50μl酚：氯仿：异戊醇＇�/span>25９�/span>24９�/span>1），轻轻颠倒混匀10min

4) 10000g以上常温离心10min，吸取上渄�/span>

5)加入50μl仿氯：异戊醇＇�/span>24９�/span>1）轻轻颠們�/span>10min

6) 10000g以上常温离心10min，吸取上渄�/span>(根据需要可重复用氯仿：异戊醇如上法再抽描�/span>1-2次，以充分去除蛋白和酙�/span>)

7)向上清中加入1/5-1/10体积皃�/span>pH4.8-5.2皃�/span>3M NaAc,并加�?/span>2.5倍体积无水乙醇，于－20ℂ�/span>沉淀30min以上

8) 12000g�?/span>4ℂ�/span>低温离心10min,吸干液体

9)沉淀�?/span>75％乙醇漂洗二欠�/span>

10)沉淀于室温或64ℂ�/span>以下恒温箱中干燥片刻至刚开始出现半透明状，勿过度干燥加�?/span>50μl重蒸水溶觢�/span>DNA，可亍�/span>65ℂ�/span>水浴助溶

11)叕�/span>5μl DNA电泳检�?/span>DNA的质野�/span>

12) 100-500倍稀释后于分光光度计上测宙�/span>OD260叉�/span>OD280，分枏�/span>DNA的浓度和质量

13)保存DNA亍�/span>-20ℂ�/span>

补充：如果需要提取的样品比较多（比如1g），研磨好的样品在后续的提取中，需要转移到大的epp管中，研磨时可以加入较少的抽提液，研磨完毕按�?/span>1g样品10ml提取液补充抽提液，进行后续的操作、�/span>