Biochrom30+氨基酸分析仪检测石斑鱼中水解氨基酸
摘要9/span>
以石斑鱼为原料,使用Biochrom30+全自动氨基酸自动分析仪对其肌肉的氨基酸组成进行分析。结果表明石斑鱼肌肉中氨基酸总量的质量百分比?7753.114mg/100g,必需氨基?不含色氨?占氨基酸总量?0.63%,鲜味氨基酸占氨基酸总量?8.52%、/span>
样品前处琅/span>
所用试剁/span>
浓盐酸,浓度?6%,优级?/span>
6mol/L盐酸9/span>?00mL 盐酸加水稀释至1000mL,混匀、/span>
水:去离子水
苯酚:须重蒸
17种氨基酸标准?/span>
行号 |
氨基酷/span> |
行号 |
氨基酷/span> |
||
1 |
Asp |
天冬氨酸 |
2 |
Thr |
苏氨酷/span> |
3 |
Ser |
丝氨酷/span> |
4 |
Glu |
谷氨酷/span> |
5 |
Pro |
脯氨酷/span> |
6 |
Gly |
甘氨酷/span> |
7 |
Ala |
丙氨酷/span> |
8 |
Cys |
胱氨酷/span> |
9 |
Val |
缬氨酷/span> |
10 |
Met |
蛋氨酷/span> |
11 |
Ile |
异亮氨酸 |
12 |
Leu |
亮氨酷/span> |
13 |
Tyr |
酪氨酷/span> |
14 |
Phe |
苯丙氨酸 |
15 |
His |
组氨酷/span> |
16 |
Lys |
赖氨酷/span> |
17 |
Arg |
精氨酷/span> |
前处理设夆/span>
分析天平:感量分别 0.0001g?.00001g、/span>
水解箠耐压螺盖玻璃试管,体积?5mL
匀浆机
无油真空泴/span>
干浴水解浓缩?/span>
移液箠/span>
0.22um滤膜
样品制备(参考国栆/span>GB 5009.124-2016(/span>
原料鱼手工去除鱼鳞、鱼皮、鱼刺和内脏,采肉后清洗、沥干,在匀浆机中打成肉糜,?18℃冰箱中冷冻保存,分析时取出解冻后使用、/span>
试样水解
称取含蛋發/span>7.5-25mg的试样,加入水解管中,加?/span>15mL 6mol/L盐酸+/span>继续向水解管内加入苯?滴~4滴。冷?min~5min,接到真空泵的抽气管上,抽真?接近0Pa),然后充入氮气,重复抽真?充入氮气3次后,在充氮气状态下拧紧螺盖将水解管放入干浴水解浓缩仪中+/span>110°C水解22-24h,冷却、混匀、开管、转移并定容?0ml容量瓶中,用移液管取适量样液,在干浴水解浓缩仪中50°C吹干,必要时加入少许水,重复吹干1-2次,加入3-5mL PH2.2的稀释上机用柠檬酸钠缓冲涱/span>溶解,振荡混匀?吸取溶液通过0.22μm 滤膜?转移至仪器进样瓶,为样品测定液,供仪器测定用、/span>
分析方法描述'/span>Biochrom 30+(/span>
氨基酸分析仪分析方法参数9/span>
色谱柱:Biochrom Na型阳离子交换树脂柱,4.6´20cm
分离程序9/span>
NO. |
Time |
Temp |
Buffer |
Pump |
Nin |
Rec |
Commands |
1 |
01:00 |
48 |
1 |
35.0ml/h |
ON |
OFF |
|
2 |
00:00 |
48 |
1 |
35.0ml/h |
ON |
OFF |
Reset |
3 |
01:00 |
48 |
1 |
35.0ml/h |
ON |
OFF |
Load |
4 |
06:40 |
48 |
1 |
35.0ml/h |
ON |
ON |
|
5 |
13:00 |
52 |
2 |
35.0ml/h |
ON |
ON |
|
6 |
01:00 |
52 |
5 |
35.0ml/h |
ON |
ON |
|
7 |
16:00 |
95 |
5 |
35.0ml/h |
ON |
ON |
|
8 |
04:00 |
95 |
6 |
35.0ml/h |
ON |
ON |
|
9 |
04:00 |
95 |
1 |
35.0ml/h |
ON |
ON |
|
10 |
09:00 |
48 |
1 |
43.0ml/h |
OFF |
OFF |
|
11 |
02:00 |
48 |
1 |
35.0ml/h |
ON |
OFF |
|
End |
运行时间:经分析时间+再生时间57min
反应单元温度9/span>135°C、/span>
检测波长:570nm?/span>440nm同时检测、/span>
样品中氨基酸含量的计箖/span>
样品测定液氨基酸的含量按?2)计算:
ci = cs/As ×Ai…………………?2)
式中:
ci ——–/span>样品测定液氨基酸i的含?单位为纳摩尔每毫?nmol/mL);
Ai ——–/span>试样测定液氨基酸i的峰面积;
As ——–/span>氨基酸标准工作液氨基酸s的峰面积;
cs ——–/span>氨基酸标准工作液氨基酸s的含?单位为纳摩尔每毫?nmol/mL)、/span>
试样中各氨基酸的含量按式(3)计算:
Xi =(ci ×F ×V ×M)/(m ×109)×100 …………………?3)
式中:
Xi ——–/span>试样中氨基酸i的含?单位为克每百?g/100g);
ci ——–/span>试样测定液中氨基酸i的含?单位为纳摩尔每毫?nmol/mL);
F ——–/span>稀释倍数;
V ——–/span>试样水解液转移定容的体积,单位为毫?mL);
M ——–/span>氨基酸i的摩尔质?单位为克每摩?g/mol);
m ——–/span>称样?单位为克(g);
109——–/span>将试样含量由纳克(ng)折算成克(g)的系?
100 ——–/span>换算系数、/span>
附、石斑鱼分析图谱及做样结枛/span>
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