AccuSizer® 自动颗粒计数分析仪可用于蛋白质配方优化，最大程度地减少蛋白质聚集并执行 USP <787> 亚可见颗粒物质测试、�/p>

1简今�/strong>

动态光散射 (DLS) 是检测蛋白质粒径的标准工具，但该方法不提供浓度信息。AccuSizer® 单粒子光学传感技� (SPOS) 系统可用于检测聚集蛋白粒径和浓度，可测量150nm以上的聚集蛋白浓度。图 1 显示了单抗产品热应激前后� Nicomp® DLS 结果、�/p>

加热后的结果（蓝色）显示了高分辨率的多峰结果，包括从~150 nm开始的较大的聚集峰。AccuSizer 无法检测到 10 nm 的颗粒，但可以提� >150 nm聚集蛋白的定量数据。在这项研究中，AccuSizer FX Nano 用于研究各种配方稳定化学物质如何影响NIST标准蛋白质的最终聚集状态。AccuSizer FX Nano也可用于 USP <787> 亚可见颗粒物测试1、�/p>

2材料

使用的蛋白质� NIST 标准物质 8671，批� 14HB-D002，NIST mAb，人� IgG1k 单抗2。在Nicomp动态光散射(DLS)系统上，使用35mw激光二极管源，APD检测器测量蛋白质的初次粒径。在配备两个传感器的AccuSizer FX Nano SIS系统上测量蛋白质聚集佒�LE-400; 0.5 � 400 μm � FX Nano; 0.15 � 10 μm.SIS进样器提供精确的样品体积，最小进样量低至100 μL且可回收、�/p>

iFormulate3（图 2）板预装了配方，� DoE 设计用于合理的配方开发，用于测试配方的聚集水平。评估了蛋白配方的四个主要影响因素；pH、离子强度、缓冲液和稳定剂浓度、�/p>

使用� iFormulate 板测试了以下影响因素９�/p>

� pH�? � 7.6

� 离子强度�? � 200 mM NaCl

� 海藻糖稳定剂�? � 10 %

� 缓冲液浓度：10 � 50 mM

3方法

� NIST mAb 解冻并稀释至 1 mg/mL，将 160 μL 过滤的去离子水添加到 iFormulate 板的每个孔中。每孔加�?0 μL NIST mAb。将培养皿置�?0°C(刚好低于蛋白质熔�?的烤箱中24小时。使� AccuSizer 颗粒计数器分析每个孔。将>0.15 μm(�?�?gt;0.53 μm的颗粒计数数据提交给iformula，由iformula进行数据分析和稳定性建模、�/p>

4结果

数据使用帕累托分析方法处理，帕累托分析方法在多影响因素下十分有效。帕累托分析给出了影响因素排名和影响因素之间的相互作用。图 3 和图 4 分别显示� >0.15 μm � >0.53 μm 的帕累托分析。颜色表示配方变量对增加的颗粒计数的相对重要性，蓝色 = 重要，灰� = 临界，红� = 不太重要、�/p>

下面的结果显示了不同条件下聚集效应的 3D 响应曲面图。这种设计空间提供了通过检测在两个粒径范围内颗粒浓度的方法，以此来确定可最大限度减少聚集配方。图 5 和图 6 显示了在保持缓冲液和 NaCl 浓度不变的情况下，改� pH 值和稳定剂（海藻糖）的结果、�/p>

�? pH值和稳定剂的影响>0.15μm

�? pH值和稳定剂的影响>0.53μm

� 7 和图 8 显示了不� NaCl 和稳定剂（海藻糖）浓度的结果，同时保持缓冲液浓度稳定� pH 值从 5.91 略微变化� 6.3、�/p>

�? NaCl和稳定剂的作�?gt;0.15μm

�? NaCl和稳定剂的作�?gt;0.53μm

然后对这些结果以及此处未显示的其他结果进行整理，�?和图10显示了最小粒子数优化图、�/p>

�? 颗粒最小化�?gt;0.15μm

�?0 颗粒最小化�?gt;0.53μm

5结论

此处显示的结果表明，可最大程度减少颗粒计数并因此减少蛋白质聚集的最佳化学制剂为９�/p>

pH = 6.1 � 6.3

NaCl = 40 � 70 mM

海藻� = 7 � 8%

缓冲� = 50 mM

AccuSizer也可用于在≥10�?5μm的条件下进行USP�?87＞测试，并可使用A2000 USP微孔板分析仪实现自动化、�/p>