用于细胞密度和分布评估的方法

?从生物反应器�? mL样品体积。进行三次的洗脱后，�?.1 M柠檬酸�?.1%结晶紫和0.1% Triton X-100溶液裂解细胞、�/p>

?37℃孵�?小时后，用血细胞计数器对染色的细胞核进行计数。该方法详细描述，参见Trabelsi et al.文章（Khaled Trabelsi� 2004）、�/p>

工艺参数（用于两种培养）

?添加4 mM谷氨酰胺的无血清培养基（VP-SFM� Gibco?（�/p>

?补加葡萄糖和谷氨酰胺原液，以分别防止两种底物低于8 mM�? mM

?使用CO₂� 0.5 NaHCO₃（微载体）或0.5 NaOH（scale-X）将pH值控制为7.2

?温度设定点为37ℂ�/p>

?溶氧设定点为50%（顶部空间通气（�/p>

VERO细胞生长

比较不同生物反应器系统内�?*Vero细胞密度（Kiesslich�?020）（�?）：

scale-X hydro 生物反应器（2.4 m²（�2.7 x 10⁵cells/cm²

STR Cytodex? 1�?.75 m²）：2.4 x 10⁵cells/cm²

不同的细胞接种密度导致了不同但相当的生长曲线图。scale-X生物反应器中的单位面积细胞密度（2.7x 10⁵cells/m²）略高于微载体培养（2.4 x 10⁵cells/m²）。两种系统的培养基使用量接近，为2.1 - 2.2 ��10⁹cells/L_{培养培�/sub>。当考虑两个系统在同等产量下的反应器体积时，固定床生物反应器的设备占地显著降低（降低5倍）、�/div>}

�?. 相比标准微载体培养，scale-X hydro生物反应器中的Vero细胞生长，由Kiesslich et al.�?020）提供、�/span>

Univercells进行了延长的Vero细胞生长研究（图5）。在scale-X hydro生物反应器中进行了多次实验（n=26），获得了可重复的细胞密度，平均�?.5��10⁵cells/cm²。规模放大至更大的scale-X carbo生物反应器（10m²�?0m²），可获得相似的单位面积细胞密度、�/p>

�?. Vero 细胞曲线图：试验以Vero 细胞生长在不同scale-x 规格体积（内部数据）

在结构化、螺旋卷式固定床中的Vero细胞分布

在培养的不同阶段�?.7��10⁵cells/cm²�?.3��10⁵cells/cm²时，�?），对Vero细胞分布进行了研究。为此，从展开的固定床中提取了9个样本，并测定细胞密度、�/p>

在scale-X hydro生物反应器中，Vero细胞在固定床中轴向和径向均匀分布。研究进行了进一步的计算机流体动力学研究，结果显示，在结构化固定床中没有死区和非均匀性（数据未显示）。均匀的细胞生长使可用表面积得到充分利用、�/p>

�?. scale-X生物反应器的结构化固定床中的Vero细胞生长分布、�/p>

细胞沿径向（从中心半径）和轴向（固定床高度）均匀分布。（a.）由Kiesslich et al.�?020）友情提供，（b.）在Univercells实验室进行、�/span>

总结

在这两种工艺中，贴壁Vero细胞达到了相同的密度。当转移到更大的固定床scale-X生物反应器时，达到了类似的细胞生长趋势和**单位面积细胞密度�?后，对Vero细胞生长分布的研究显示，固定床内有均匀的细胞贴壁和生长。与微载体工艺相比，固定床的紧凑设计使设备占地面积降�?倍、�/p>

总体而言，结果表明，结构化的scale-X固定床生物反应器系统是传统“规模扩展”技术的合适替代方案，后者如多层培养皿和滚甁，也包括具有一定技术挑战性的培养系统，如微载体工艺、�/p>

目前的scale- X生物反应器可以转化至生产规模�?00 m²），并整合到连续的NevoLine?生产平台中。NevoLine系统将强化的上游工艺与连续的下游工艺相结合，以降低资本投入和运营成本，实现低成本、大规模的生产能力、�/p>

参考文�?/span>

Khaled Trabelsi� S. R. (2004). Comparison ofvarious culture modes for the production of rabies virus by Vero cells grown onmicrocarriers in a 2-l bioreactor. Enzyme and Microbial Technology.

Kiesslich� S.V.-C.-F. (2020). Serum-free production of rVSV-ZEBOV in Vero cells:Microcarrier bioreactor versus scale-X? hydro fixed-bed. Journal of Biotechnology.